細(xì)胞分選是細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)最重要的技術(shù)方法及必要前提，根據(jù)細(xì)胞的類型及后續(xù)試驗(yàn)?zāi)康?，目前技術(shù)比較成熟且應(yīng)用較廣泛的主要有：密度梯度離心法、免疫密度離心法、免疫磁珠法和流式技術(shù)等。隨著科技的不斷進(jìn)步，相信各種方法越來越完善，同時(shí)一些新的方法也在研究之中，如微芯片CHIP技術(shù)。
其中，免疫磁珠技術(shù)因具有特異性好、靈敏度高、分選速度快、使用方便、成本低、應(yīng)用廣等特點(diǎn)，自應(yīng)用推廣以來受到廣泛而大量的應(yīng)用，目前已經(jīng)成為最主要的細(xì)胞分選方法。常見問題及注意事項(xiàng)如下。
免疫磁珠技術(shù)的原理：
1、基于抗體對(duì)抗原的特異性識(shí)別；
2、磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從而與細(xì)胞相連進(jìn)行標(biāo)記（如下圖）；
??
3、在高強(qiáng)度、梯度磁場(chǎng)中標(biāo)記的細(xì)胞被磁性吸附，未標(biāo)記細(xì)胞首先流出，然后洗脫被吸附的細(xì)胞（陽性分選）達(dá)到細(xì)胞磁性分離的目的。
免疫磁珠細(xì)胞分選過程中常見問題：
1、都能分選哪些細(xì)胞？
答：理論上可以分選所有的細(xì)胞，但需要根據(jù)所分選細(xì)胞的特性開發(fā)出相應(yīng)抗體的磁珠。實(shí)際上，目前市場(chǎng)上已經(jīng)進(jìn)行能夠購(gòu)買到幾乎所有常用的細(xì)胞分選磁珠。
2、需要哪些設(shè)備和試劑耗材？
答：需要的設(shè)備有：分選器（提供磁場(chǎng)）、分選架（為分選器提供支撐的支架）；所需耗材有：分選柱（細(xì)胞分離及洗脫的容器）和磁珠。根據(jù)分選方式、分選量以及操作方式可選多種類型分選器（Mini免疫磁珠細(xì)胞分選儀、Midi免疫磁珠細(xì)胞分選儀、Mini&Midi免疫磁珠細(xì)胞分選儀、 Super 免疫磁性細(xì)胞分選儀、?Vario 免疫磁性細(xì)胞分選儀以及autoMACSTM Pro全自動(dòng)免疫磁珠分選儀等），其中手動(dòng)方法分選最常用的的是Mini&MidiMACS分選器，autoMACSTM Pro全自動(dòng)免疫磁珠分選儀則大量應(yīng)用于醫(yī)院等大量分選細(xì)胞的單位。
3、分選柱是否可重復(fù)使用？
答：分選柱屬耗材，不可永久重復(fù)使用，可處理后重復(fù)使用2-5次。處理方法：將長(zhǎng)試管注滿PBS，回抽柱子的活塞，倒出回抽液。倒入新的PBS，打出之；重復(fù)兩次---此時(shí)基本上將柱子內(nèi)的雜細(xì)胞除盡。再抽、打兩三次無水酒精或95%酒精，然后置于50-60度烘箱，過夜，即能防止生銹。
4、一支分選柱能分選多少細(xì)胞？
答：根據(jù)柱子種類不同，具體能分選的細(xì)胞數(shù)目同，基本數(shù)量應(yīng)在107～1010間。詳細(xì)信息參考說明書材料。
5、一瓶磁珠能使用多久？或能分選多少細(xì)胞？
答：一瓶2ml裝大約可以分選109個(gè)細(xì)胞。
6、分選的細(xì)胞純度是多少？
答：良好的實(shí)驗(yàn)條件及正確的操作下，一般的純度都在90%以上。
7、一次分選所需時(shí)間？
答：手動(dòng)操作在30分鐘內(nèi)可完成分選，自動(dòng)分選2.5-10分鐘即可。
8、分選后的細(xì)胞可以進(jìn)行哪些應(yīng)用？
答：分選后，不活化細(xì)胞，不改變細(xì)胞功能，分選細(xì)胞活性好，則可用于進(jìn)一步的細(xì)胞培養(yǎng)或細(xì)胞與分子水平的分析。
?免疫磁珠細(xì)胞分選過程中注意事項(xiàng)：
1、待分選細(xì)胞中如有貼壁細(xì)胞，建議在分選前先貼壁培養(yǎng)去除，或者提高EDTA濃度。
2、抗體包被磁珠對(duì)死細(xì)胞常有非特異性結(jié)合。因而分選前去除死細(xì)胞。
3、新鮮分離骨髓細(xì)胞，先用膠原酶、DNA酶、胰酶聯(lián)合消化，可使細(xì)胞團(tuán)塊解聚，從而提高分離效率。
4、上分離柱前，充分振蕩，混懸細(xì)胞，打散細(xì)胞團(tuán)塊。
5、用分離柱分選，應(yīng)用真空抽濾水，減少水中氣泡，使分離柱不被氣泡阻滯。
6、細(xì)胞懸液加入分離柱中時(shí)，應(yīng)將滴管伸至底壁后加入，避免將細(xì)懸液沿管壁流入，使管壁殘流末分選細(xì)胞，以致后繼洗柱過程中，因疏忽末被洗下，最后導(dǎo)致純度不高。洗柱時(shí)，應(yīng)在前次液體充分流盡后，再加洗液。
7、分選細(xì)胞量應(yīng)根據(jù)說明書控制，不超量。
8、孵育時(shí)間和溫度應(yīng)按說明書進(jìn)行，延長(zhǎng)孵育時(shí)間、提高溫度會(huì)增加非特異結(jié)合。
9、先用抗體阻斷Fc受體，可降低非特異性結(jié)合。
| 電話 010-52571502 010-51248120 郵箱 hedebio@163.com |
